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No.13 关于洗脱液
在HPLC分析中当获得的数据不能获得良好再现性时,常倾向于认为是色谱柱引起的,但实际上有很大可能性存在系统的维护不够等柱以外原因。在此仅就选用的有机溶剂级别不同而造成的对峰形的影响为例进行介绍。
右图为选用乙腈/水为洗脱液,对碱性化合物分析的谱图。峰2为碱性化合物。图1是使用HPLC级乙腈测定的结果,图2是优级乙腈测定的结果(其它条件相同)。在使用HPLC级乙腈时表现为峰形较宽,而使用优级乙腈时,却得到了良好的峰形。同时,优级乙腈根据生产厂家的不同,获得的峰形也会存在差异。这可能是因为乙腈内存在微量杂质,如同向洗脱液中添加了缓冲盐一样起相似的作用。
当洗脱液更换为乙腈/5mM醋酸铵时,无论是优级乙腈、还是HPLC级都可以获得如图2相同的峰形。
因此为了避免由于溶剂级别对分析产生的影响,建议选用HPLC级用溶剂。同时,虽然有时使用不含酸或盐的洗脱液时也可将含可解离基团的化合物进行充分分离,但考虑到分析再现性时建议选用含有缓冲盐的溶剂进行分离。