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抗体的分析

抗体的分析根据目的不同使用各种分离模式,离子交换以表面电荷的不同为基础进行分离,对电荷变异分析有良好效果。尺寸排阻因根据分子尺寸大小进行分离,适用于单体和二聚体、聚集体和分解物的分离,反相分离以高分离能和高分解能,利用构造解析等。

分離モードによる抗体の分離比較

モノクローナル抗体

抗ヒトモノクローナル抗体をイオン交換とサイズ排除で分離しました。サイズ排除モードでは、モノマーと凝集体が分離できました。イオン交換モードでは、アイソフォームに由来すると考えられる複数のピークが認められました。

Mouse monoclonal IgG1 anti-human IgG4 (Purified by DEAE chromatography, containing NaN3)

イオン交換

BioPro IEX QF   5 μm, 30 X 4.6 mmI.D.

Eluent A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1)
B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 0.5 M NaCl
10-25%B (0-18 min)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 25ºC
Detection UV at 220 nm
Injection 10 µL (0.1 mg/mL)

サイズ排除

YMC-Pack Diol-200   5 μm, 300 X 4.6 mmI.D.

Eluent 0.1 M KH2PO4-K2HPO4 (pH 7.0)
Flow rate 0.17 mL/min
Temperature ambient (25ºC)
Detection UV at 220 nm
Injection 10 µL (0.05 mg/mL)

IgG Fcフラグメント

IgGおよびFcフラグメントをサイズ排除と逆相で分離しました。サイズ排除モードでは、IgG全分子とフラグメントが分離できました。逆相モードでは、フラグメント中の成分のわずかな修飾の違いも高分解能で分離することができました。

Mouse IgG Fc fragment (Prepared from normal serum)

サイズ排除

YMC-Pack Diol-200   5 μm, 300 X 8.0 mmI.D.

Eluent 0.1 M KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.9)
containing 0.2 M NaCl
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature ambient (27ºC)
Detection UV at 220 nm
Injection 5 µL (0.5 mg/mL)

逆相

YMC-Pack C4 (30 nm)   5 μm, 150 X 4.6 mmI.D.

Eluent A) water/TFA (100/0.1)
B) acetonitrile/TFA (100/0.1)
25-45%B (0-40 min)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 37ºC
Detection UV at 220 nm
Injection 5 µL (1.0 mg/mL)

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