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抗体的分析
抗体的分析根据目的不同使用各种分离模式，离子交换以表面电荷的不同为基础进行分离，对电荷变异分析有良好效果。尺寸排阻因根据分子尺寸大小进行分离，适用于单体和二聚体、聚集体和分解物的分离，反相分离以高分离能和高分解能，利用构造解析等。
不同分离模式下的抗体分离
单克隆抗体
下图为使用离子交换与体积排阻对抗人单克隆抗体的分离案例。体积排阻模式下，实现了单体与其凝聚体的分离。离子交换模式下，可以确认到源自异构体的多个峰。
Mouse monoclonal IgG1 anti-human IgG4 (Purified by DEAE chromatography, containing NaN3)
离子交换
BioPro IEX QF 5 μm, 30 X 4.6 mmI.D.
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 0.5 M NaCl 10-25%B (0-18 min) |
|---|---|
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 25ºC |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 10 µL (0.1 mg/mL) |
尺寸排阻
YMC-Pack Diol-200 5 μm, 300 X 4.6 mmI.D.
| Eluent | 0.1 M KH2PO4-K2HPO4 (pH 7.0) |
|---|---|
| Flow rate | 0.17 mL/min |
| Temperature | ambient (25ºC) |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 10 µL (0.05 mg/mL) |
IgG Fc片段
下图为使用尺寸排阻与反相对IgG及Fc片段的分离。尺寸排阻模式下可将IgG全分子与Fc片段分开。反相模式下因具有很高的分辨率，因此可分离Fc片段中差异很小的组分。
Mouse IgG Fc fragment (Prepared from normal serum)
尺寸排阻
YMC-Pack Diol-200 5 μm, 300 X 8.0 mmI.D.
| Eluent | 0.1 M KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.9) containing 0.2 M NaCl |
|---|---|
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | ambient (27ºC) |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 5 µL (0.5 mg/mL) |
反相
YMC-Pack C4 (30 nm) 5 μm, 150 X 4.6 mmI.D.
| Eluent | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) 25-45%B (0-40 min) |
|---|---|
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 37ºC |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 5 µL (1.0 mg/mL) |