技术信息
多肽和蛋白质的分析应根据分子量、疏水性及样品特性选择合适的分离模式和色谱柱。高分辨分析可使用反相或离子交换色谱，尺寸排阻色谱可获得分子量分布信息。
同一样品采用离子交换、尺寸排阻和反相三种模式时，可分别利用电荷、分子大小和疏水性差异获得互补信息。
| 离子交换色谱 | BioPro IEX，适用于按电荷差异分离多肽和蛋白质。 |
|---|---|
| 尺寸排阻色谱 | YMC-Pack Diol，适用于聚集体、单体及片段的分子量分布评价。 |
| 反相色谱 | YMC-Triart，适用于多肽和蛋白质的高分辨分析。 |
分子量较小的多肽通常选择 12 nm 孔径；分子量较大的蛋白质和抗体建议选择 20-30 nm 宽孔径色谱柱，以改善传质和峰形。
| 分析对象 | 推荐色谱柱 | 建议孔径 |
|---|---|---|
| 多肽（MW < 10,000） | YMC-Triart C18/C8 | 12 nm |
| 蛋白质（MW 10,000-100,000） | YMC-Triart Bio C4 | 20-30 nm |
| 抗体及大分子蛋白 | YMC-Triart Bio C4 | 30 nm |
建议从水/乙腈加酸的梯度条件开始，根据样品分子量选择合适孔径，再逐步优化酸种类与浓度、梯度斜率和有机溶剂组成。TFA 可作为初始条件，必要时可比较甲酸或加入 2-丙醇。
| 流动相 | A：水/酸，B：乙腈/酸 |
|---|---|
| 检测波长 | UV 220 nm |
| 柱温 | 25-60 ℃，大分子样品可优先考察高温条件 |
提高柱温通常可以改善大分子蛋白质的峰形并缩短分析时间。YMC-Triart 具有优异的高温耐久性，可在优化温度下稳定使用。
