填料
MacroSep IEX Q 是具有独特大孔结构的强阴离子交换填料，针对病毒载体、质粒 DNA 等大分子新型药物进行了优化设计，可实现高分离能力、高吸附容量和高速纯化。
MacroSep IEX Q 填料
BioPro IEX SmartSep 填料
| 规格 | |
| 基材 | 亲水性甲基丙烯酸酯聚合物 |
|---|---|
| 粒径 | 30 μm |
| 孔径 | 900 nm |
| 离子交换基团 | -R-N+(CH3)3 |
| 离子交换容量（meq/mL-resin） | 0.09 |
| 动态吸附容量（mg/mL-resin） | 30（甲状腺球蛋白） |
| 使用 pH 范围 | 2-12 |
AAV Full/Empty 衣壳分离中，即使提高流速，MacroSep IEX Q 仍能保持良好分离，能够缩短纯化时间。
| 色谱柱 | 50 × 5.0 mm I.D.（1 mL） |
|---|---|
| 流动相 | A) 20 mM Bis-tris propane-HCl（pH 9.0） B) 含 0.5 M TMAC 的同缓冲液（pH 9.0） |
| 梯度 | 10-50%B（45 CV） |
| 温度 | 25°C |
| 检测 | FLS：Ex. 280 nm，Em. 348 nm |
| 进样量 | 30 μL |
| 样品 | AAV2（1.07 × 1011 vg/mL） |
AAV Full/Empty 衣壳分离实例中，Full 衣壳精制馏分经超速离心分析（AUC）测得纯度约为 85%。
| 色谱柱 | MacroSep IEX Q（30 μm），90 × 15 mm I.D.（16 mL） |
|---|---|
| 流动相 | A) 20 mM Bis-tris propane-HCl（pH 9.0），1% 蔗糖，0.1% poloxamer 188 B) 含 0.5 M 氯化胆碱的同缓冲液 |
| 流速 | 31.8 mL/min（1080 cm/hr） |
| 温度 | 室温 |
| 检测 | UV 260 nm |
| 进样量 | 358 mL |
| 样品 | AAV2（4.27 × 1012 vg/mL） |
MacroSep IEX Q 可将转染效率较高的 supercoiled 体与会降低转染效率的 linear 体、open circular 体良好分离，峰形较商用离子交换填料更尖锐。
| 色谱柱 | 50 × 5.0 mm I.D.（1 mL） |
|---|---|
| 流动相 | A) 20 mM Tris-HCl（pH 8.5） B) 含 1.0 M NaCl 的同缓冲液 |
| 梯度 | MacroSep：82%B（0-1.5 min），82-86%B（1.5-22.5 min） 商用填料：77%B（0-1.5 min），77-81%B（1.5-22.5 min） |
| 流速 | 0.4 mL/min（122 cm/hr） |
| 温度 | 25°C |
| 检测 | UV 260 nm |
| 进样量 | 10 μL（60 μg/mL） |
针对大分子质粒 DNA，MacroSep IEX Q 比传统填料显示出更高的 DBC 和良好回收率，有助于提升生产效率。
| 色谱柱 | MacroSep IEX Q：26 × 7 mm I.D.（1 mL） 商用填料 C：20 × 8 mm I.D.（1 mL） |
|---|---|
| 平衡缓冲液 | 100 mM 醋酸钠-醋酸（pH 5.0） |
| 洗脱缓冲液 | 平衡缓冲液 + 1 M NaCl |
| 流速 | 0.5 mL/min（停留时间 2 min） |
| 温度 | 室温 |
| 检测 | UV 260 nm |
| 样品 | pRP[Exp]-Puro-TRE3G>EGFP（4934 bp） |
| 样品浓度 | 0.2 mg/mL pDNA |
| DBC（mg/mL-resin，10% breakthrough） | 回收率（%） | |
|---|---|---|
| MacroSep IEX Q | 7.5 | 101 |
| 商用离子交换填料 C | 1.3 | 101 |
