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小干扰（siRNA)的液相分析

2024-01-04 09:56

siRNA的作用原理是通过切断致病基因mRNA达到抑制基因表达的目的。目前，siRNA药物研发已成为研究热点之一。

siRNA一般由一条长约20mer的双链RNA组成。在加热或碱性条件下互补链可发生变性，解链成两条单链。根据不同场合的需要，siRNA的分析可分为非变性的双链分析与变性态的单链分析。

此处，概述了上述两种形态的siRNA在反相模式与离子交换模式下的分析。

反相模式下的分析

该案例使用生物惰性色谱柱Accura Triart Bio C18对双链siRNA及其正义链与反义链进行了分析。流动相中使用的离子对试剂为三乙胺（TEA），酸性改性剂为六氟异丙醇（HFIP）或醋酸。可以看到，随柱温升高，两种条件下的双链siRNA均变性成单链形式洗脱。与使用HFIP条件相比，添加醋酸的条件在低温下即发生变性。由此可知，因离子对试剂的种类、添加酸种类等的差异，可能会引起分离或变性状态的改变。

在寡核苷酸的分析中，常因磷酸根的存在而引起柱管硬件等的吸附问题。研究证明使用生物惰性色谱柱，可以很好的抑制该类吸附，进而获得良好峰形。

离子交换模式下的分析

该案例中使用阴离子交换色谱柱BioPro IEX QF对siRNA进行了分析。在pH8.1的不同温度条件下，双链均完整洗脱。同时从图中可以看到单链的正义链与反义链在25℃、40℃时存在峰展宽现象，推测是由于其自身序列存在互补形成内部折叠造成的。随温度的升高，这些内部折叠的双链发生解链，从而展示出尖锐峰形。