BioPro HIC BF

固定相疏水性偏高的HIC色谱柱

因BioPro HIC BF采用高疏水性设计，故与BioPro HIC HT和其他色谱柱相比对蛋白质的保留会更强。适于分离那些在常规色谱柱上因疏水性偏小而无保留的蛋白。

Column	100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) containing 2.0 M (NH4)2SO4 B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 0%B (0-1 min), 0-100%B (1-11 min), 100%B (11-15 min)
Flow rate	0.5 mL/min
Temperature	25ºC
Detection	UV at 280 nm
Injection	15 µL
Sample	1. Adalimumab (0.5 mg/mL) 2. Trastuzumab (0.5 mg/mL)

适于分离低疏水性的蛋白

下图展示了抗体医药品的特性表征之一氧化物的分析案例。与非氧化抗体相比，氧化抗体峰的在较低疏水区域溶出，因此适用于对蛋白有强保留的BioPro HIC BF。

氧化抗体的分析

使用tert-Butyl hydroperoxide (t-BHP)氧化单克隆抗体（NIST mAb）的甲硫氨酸残基，之后使用BioPro HIC BF分析其氧化物。
色谱图（a）使用含（NH4)2SO4的流动相条件，非氧化抗体峰的前面可以看到4个峰，推测为其氧化峰。推测为因甲硫氨酸残基的氧化造成其构造的改变，因此造成其疏水性发生了改变。将添加盐改为NaCl时（色谱图（b）），分离度得到了提升，可以检测到8个氧化峰。

Column	BioPro HIC BF 4 μm, 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 　containing salt B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 40-80%B (0-40 min), 80%B (40-45 min)
Flow rate	0.3 mL/min
Temperature	25ºC
Detection	UV at 280 nm
Injection	5 µL (1.0 mg/mL)

氧化物碎片的分析

使用木瓜蛋白酶处理NIST mAb的氧化物及其非氧化物，对其Fab和Fc碎片进行分析。在非氧化物的分析中可以分离出Fab和Fc，氧化处理的碎片中除分离出Fab及Fc，在它们的低疏水性区分离出小峰推测为其氧化物*。
*Journal of Chromatography A, 2008, 1214, 81-89

Column	BioPro HIC BF 4 μm, 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 　containing 2.0 M (NH4)2SO4 B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 40-80%B (0-10 min)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	25ºC
Detection	UV at 280 nm
Injection	5 µL (0.5 mg/mL)

高载样量下亦可获得良好峰形

BioPro HIC BF色谱柱即使在提高样品载样量的情况下，亦可获得良好峰形。因此，适于想通过提高总上样量检测副产物或小量制备的情况。

Column	BioPro HIC BF 4 μm, 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 　containing 2.0 M (NH4)2SO4 B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) 60%B (0-0.5 min), 60-100%B (0.5-7.5 min), 100%B (7.5-10 min)
Flow rate	1.2 mL/min
Temperature	30ºC
Detection	UV at 280 nm
Sample	Humanized monoclonal IgG (2.5 mg/mL)

テクニカルインフォメーション

• 影响疏水色谱分离的主要因素（英）
• HIC分析单抗氧化物(英)

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